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使用FH237进行HSE分析

人痰弹性蛋白酶活性测定(62) 

用meo - su - ala - ala - pro - val - pna (EPC编号. FH237)作为底物.

所需的材料

1.     Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含有0.5 M氯化钠. 溶解12.70g Tris-HCl, 2.36g Tris-base和29.900ml H中加入22g NaCl2O. 测定pH值,必要时用0.1 M HCl或0.1 M NaOH到pH 7.5在25ºC. 带至1000毫升H2O.

2.     底物溶液0.2 mM. 溶解12.0 mg meo - su - ala - ala - pro - val - pna (EPC编号. FH237) 1.0毫升1-甲基-2-吡咯烷酮.  最后加入Tris-NaCl缓冲液至100ml.

3.      弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升在0.05 M NaOAc pH 5含0.1 M氯化钠. 配制第二次稀释剂0.10mg / ml在同一缓冲液中. 将两种溶液放入冰浴中冷藏.
 

过程

1.     将分光光度计调至410 nm,电池温度调至25℃.

2.     平衡3.0 ml底物溶液至25ºC.

3.     添加0.0ml弹性蛋白酶溶液(0.10mg /ml),混合后每隔2-3分钟测定吸光度增加速率.  增加的速度应在5 - 10分钟内呈线性.
 

比活度计算 

Î,  1% , 280 = 6.65mg /ml = A280 x1.50

 = 3卷.1毫升                = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

单位  =  ∆A / x 3分钟.01 ml
mg           8.8 x 0.001 mg

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