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使用NS945进行HSE检测

酶测定方法

人痰弹性蛋白酶活性 

以n - su - ala - ala - pna为底物(44).

所需的材料

  1. Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含有0.5 M NaCl和0.01%的南3.   溶解12.70g Tris-HCl, 2.36 g Tris-base 29.22 g NaCl和0.10克南3 900毫升H2O.  测定pH值,必要时用0.1 M HCl或0.1 M NaOH到pH 7.5在25ºC.  带1000毫升水.
     
  2. 底物溶液,1.0 mM. 溶解45.5mg n - al - al - pna (EPC编号. NS945) 2.0毫升1-methyl-2-pyrrolidone.  加入Tris-NaCl缓冲液至终体积100ml.
     
  3. 弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升(0.05 M NaOAc pH 5含0.1 M氯化钠). 在冰浴中保持寒冷.


过程

  1. 将分光光度计调至410 nm,电池温度调至25℃.
     
  2. 平衡3.0 ml底物溶液至25ºC.
     
  3. 添加0.01毫升弹性蛋白酶溶液, 每隔2-3分钟混合并测定吸光度的增加速率. 增加的速度应在5 - 10分钟内呈线性.
     

比活度计算

Î, 1% , 280 = 6.65mg /ml = A280 x1.50

= 3卷.1毫升= 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

8.8 = mM的pNA在410 nm处的消光系数

单位  =  ∆A410 x 3.01 ml
mg          8.8 x 0.01 mg

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