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人皮肤乳糖酶活性

人皮肤糜酶活性的测定

以n -苯甲酰- l-酪氨酸乙酯为底物(86)

所需的材料

1. Buffer; 0.6 M Tris-HCl pH 8.0包含3.0 M NaCl, 25°C. 溶解53.3克Tris-HCl, 31.8克Tris-base和175.3 gm NaCl加900 ml H2O. 滴定到pH值8.0, 25°C,带至1000ml水.

2. Substrate; 1.0 mM. 将31毫克n -苯甲酰- l-酪氨酸乙酯溶于100毫升30% (v/v)乙醇水中.

3. 酶解. 准备0.1毫克每毫升在0.5 M NaOAc H 5.0. 冰浴中保持5°C.

过程

1. 将分光光度计调至256nm,电池温度调至25°C.

2. 吸管1.5毫升缓冲液和1毫升.5毫升底物注入细胞. 混合,在电池中平衡至25°C.

3. Add 10 μl enzyme solution; mix and record increase in A256 nm/min for 2-4 minutes.

比活度计算

= 3卷.1毫升= 256海里T = 25°C光路我= 1厘米,1毫米酪氨酸= 0.964

单位  =  ∆A256x(3 /分钟.01 ml)
mg             0.964 x 0.001 mg

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