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使用NS945进行PPE试验

猪胰腺弹性酶活性的测定 

用EPC编号:su - ala - ala - pna进行分析. NS945)作为底物(44).

所需的材料

  1. Tris buffer; 0.1 M Tris pH 8.3在25ºC.  溶解6.75g Tris-HCl和8.14g Tris碱900毫升H2O.  确定25ºC的pH值.  必要时滴定至pH值8.3和0.1 M HCl或0.1 M氢氧化钠.  用H稀释至1000ml2O.
     
  2. NaOAc-NaCl buffer; 0.05 M NaOAc pH 5,含0.1 M氯化钠.  结合14.8毫升0.2 M HAc和35.2毫升0.2 M NaOAc和100ml 0.2 M氯化钠. 带至200毫升H2O.  在25ºC时滴定到pH值5.
     
  3. Substrate solution; 2.5 mM in 0.1 M Tris pH 8.3.  使用25毫克瓶n - su - ala - ala - pna (EPC No NS945), 用22毫升三缓冲液溶解内容物.  (注:用大约10毫升的缓冲液冲洗底瓶5次.)搅拌溶解.  商店下午5ºC.
     
  4. Elastase solution; dissolve 1.0毫克/毫升的NaOAc-NaCl缓冲液.  配制0.10mg / ml在同一缓冲液中.  将两种溶液放入冰浴中冷藏.
     

过程

  1. 将分光光度计调至410 nm,电池温度调至25℃.
     
  2. 平衡2.5毫升Tris缓冲液和0.5毫升底物溶液至25º.
     
  3. 添加0.005毫升的0.10mg ml弹性蛋白酶溶液,每隔1分钟混合并测定吸光度的增加速率.  利率的增加应该是ca. 0.025 – 0.040 ∆410 海里每分钟.


比活度计算

Î, 1%, 280 = 19.5为猪胰腺弹性蛋白酶

毫克/毫升=280 x 0.51

= 3卷.T=25ºC光路=1.0 cm

8.8=mM的pNA在410 nm处的消光系数 

单位  =  ∆A410 x 3.005 ml
mg         8.8 x 0.0005 mg

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